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          安捷倫液相色譜儀的常見故障及解決方法

          更新日期: 2014-12-10
          瀏覽人氣: 14450

          安捷倫液相色譜儀的常見故障及解決方法

              安捷倫液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比

          的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。由于安捷倫液相色譜儀

          HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集

          等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機

          分析等各種領域。但是由于人員素質 樣品的性質以及儀器本身等方面的原

          因, 常常出現這樣那樣的分析故障嚴重影響了正常的生產分析。所以掌握一種

          準確、快速的排除儀器故障的方法非常重要。


          安捷倫液相色譜儀的常見故障及解決方法:

          1.柱壓高

            可能原因:(1).緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內;

                      (2).樣品污染沉積;

              處理對于*種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓

          逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下 降后,用常溫純水沖洗,之

          后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18

          柱,和純水反向沖洗柱子,換成甲醇沖洗,接著用甲 醇+異丙醇(4+6)沖洗

          柱子,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分

          鐘以上。

          2.指示

            可能原因:(1).泵密封墊圈磨損;

                      (2).大量氣泡進入泵體。

              處理對于*種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同

          時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

          3.不穩定

            原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。

            處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸

          入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,

          放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

          4.峰分叉

            可能原因:(1)、色譜柱被污染;

                      (2)、柱頭填料塌陷;

              處理對于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著

          用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的 長短由樣品污染的情況而

          定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘

          以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第 二種情況,擰開

          柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填

          料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹 鋼桿

          壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干

          凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

          5.重復性差

            可能原因:(1)、進樣閥漏液;

                      (2)、加樣針不到位;

                      (3)、液量不足;

              處理對于*種情況更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到

          底,注射樣品溶液后須快速、平穩地從LOAD狀態 轉換到INJECT狀態,以保證

          進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養非常重要,注意不要讓空氣進

          入輸液系統和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未 用應清洗儲液器并更換

          溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;

          樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質,*溶解,盡量減

          少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶

          液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分

          析目的的色譜柱不要混用等。

           6.其他原因及處理方法

          故障類型

          可能的原因

          解決方案

          基線噪聲大

          隨機性- 污染物積聚沖

          沖洗柱;凈化樣品;使用HPLC 級溶劑

          連續性- 檢測器燈故障

          更換紫外燈(壽命為1000 小時)

          偶然性- 外部電氣干擾

          使用LC 系統穩壓器

          樣品量過大

          進樣量應為流動相進樣量的1/6

          雙峰

          樣品量過大

          進樣量應為流動相進樣量的1/6

          進樣溶劑過強

          使用較弱的進樣溶劑或流動相

          濾芯堵塞

          更換并使用0.5 μm 孔隙率的在線過濾器

          柱有空隙或氣溝

          用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱

          進樣器流路不通暢

          更換進樣器轉子

          柱頭有空隙

          使用填料或玻璃珠填充柱頂部

          柱上樣品超載

          使用更高負載量的固定相 增加色譜柱內徑 減少樣品量

          單峰- 存在干擾性組分

          凈化樣品;預分離

          拖尾峰

          開始出雙峰

          請參見雙峰

          存在未掃的死體積

          減少接頭的數量 確保進樣器密封墊緊密 確保接頭正確固定

          堿性化合物- 硅醇相互作用

          換成聚合物固定相

          堿性物質- 硅醇相互作用

          使用更強的流動相或添加競爭堿(例如,*胺

          硅膠基- 柱降解

          使用特種色譜柱;聚合物柱或空間位阻

          峰展寬

          進樣量過大

          降低進樣溶劑的強度以集中溶質

          進樣閥中的峰擴散

          在進樣前/后引入氣泡以減少擴散

          數據系統的采樣速率過低

          增大采樣

          檢測器時間常數低

          調節時間常數使之與峰寬匹配

          流動相粘度過高

          提高柱溫

          檢測器池容積過大

          使用盡可能小的池容積(系統中無熱交換器)

          注射器體積過大

          減少進樣量

          保留時間長

          使用梯度洗脫或較強的流動相

          壓力波動

          單向閥泄漏

          更換單向

          泵密封墊泄漏

          更換泵密封

          微粒積聚

          過濾樣品;在線過濾器;過濾流動相

          壓力漸增

          微粒積聚

          過濾樣品;在線過濾器;過濾流動相

          水/有機系統- 緩沖液沉淀

          測試緩沖液-有機混合物;確保兼容性

          保留超出總滲透體積

          體積排阻- 特異性相互作用

          添加流動相改性劑或更改溶劑

          保留時間不斷變動

          柱溫不斷變化

          使柱恒溫;絕緣;保證實驗室溫度恒定

          平衡時間不足以適應梯度洗脫要求,或等度洗脫流動相起變化

          確信在溶劑改變或梯度結束后至少10 個柱容積通過色譜柱

          流動相組分選擇性蒸發

          減少氦氣的劇烈脫氣;保持溶劑貯器蓋好;制備新的流動相

          緩沖能力不足

          用>20 mM 濃度的緩沖液

          在線流動相混合不一致

          保證梯度系統輸送恒定組成;與手動制備流動相核對

          污染積聚

          沖洗色譜柱以去除污染物

          初幾次進樣— 吸附在活性部位

          用濃樣品進樣沖洗柱,使其處于正常狀態

          保留時間逐漸縮短

          流速在增加

          檢查泵以確保正確;否則需重調

          柱上進樣超載

          減少樣品

          鍵合固定相的流失

          保持流動相pH 值在2-8.5 間

          保留時間逐漸增加

          流速在減慢

          解決液流中的漏液現象,更換泵密封墊,檢查泵的渦流和氣泡

          硅膠填料的活化點

          使用流動相改性劑

          鍵合固定相的流失

          保持流動相pH 值在2-8.5 間

          流動相組成在變化

          確保流動相容器蓋好

          硅膠填料的活化點

          流動相中加競爭堿

          硅膠填料的活化點

          固定相用更高覆蓋度的填充料

          靈敏度問題

          峰位于檢測器線性范圍之外

          稀釋或濃縮使之處于線性區內

          初幾次進樣—樣品在樣品池或柱中被吸附自動進樣器 流路阻塞

          用濃樣品處理樣品池/柱

          自動進樣器流路阻塞

          檢查流量情況,確保無阻塞現象

          進樣器樣品定量管未充滿

          確保樣品池中已充滿樣品

          在樣品制品時有關的樣品流失

          用內標法在制備樣品,優化樣品制備方法

          柱平衡時間減慢(離子對現象)

          長鏈離子對試劑平衡時間慢

          使用較短的烷鏈試劑


           

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